Тезисы докладов регуляция экспрессии копий рибосомной днк, содержащих инсерции ретротранспозонов



страница1/4
Дата02.06.2018
Размер0,66 Mb.
  1   2   3   4
ТЕЗИСЫ ДОКЛАДОВ

Регуляция экспрессии копий рибосомной ДНК, содержащих инсерции ретротранспозонов

Клёнов М.С.

Лаборатория биохимической генетики животных

Отдела молекулярной генетики клетки (ОМГК)
Кластеры рибосомной ДНК (рДНК) в клетках эукариот обычно состоят из сотен повторяющихся единиц рДНК, из которых только часть транскрипционно активны. Неизвестно, чем именно определяется выбор активных и репрессированных копий рДНК. У Drosophila melanogaster от 15 до 40% копий рДНК содержат инсерции ретротранспозонов R2, которые встраиваются исключительно в строго определенный сайт в последовательности 28S рРНК. Эти транспозоны не имеют собственного промотора и при транскрипции их последовательность входит в состав предшественника пре-рРНК и затем может вырезаться при процессинге. Как правило, гены рДНК с инсерциями R2 демонстрируют очень низкий уровень экспрессии по сравнению с активными копиями неинсертированных генов рДНК, однако механизм репрессии R2 остается невыясненным. На роль фактора, определяющего репрессию копий рДНК со вставками транспозонов могут претендовать короткие некодирующие РНК, которые, как известно, участвуют в подавлении экспрессии различных транспозонов. Действительно, мы обнаружили антисмысловую транскрипцию транспозонов R2, которая является источником антисмысловых коротких РНК. Однако, мутации, нарушающие системы сайленсинга с помощью siРНК и piРНК, приводят лишь к слабому возрастанию экспрессии R2, что указывает на существование другого пути репрессии инсертированных рДНК. В то же время, короткие РНК играют определенную вспомогательную роль в подавлении R2. Оказалось, что отсутствие piРНК-связывающего белка Piwi приводит к существенной овер-экспрессии сильно укороченных фрагментов R2, которые присутствуют в геноме некоторых линий дрозофилы. Гены рДНК с короткими фрагментами R2 производят больше транскриптов, чем другие инсертированные копии. Следовательно, сильно укороченные инсерции R2, регулируемые при помощи Piwi, по-видимому, избегают воздействия со стороны «основного» механизма репрессии. Мы также исследовали возможную роль белков гетерохроматина в репрессии копий рДНК со вставками транспозонов. Несмотря на то, что хроматин копий рДНК с инсерциями R2 обогащен модификацией H3K9me3, характерной для гетерохроматина, а также белком HP1a, отсутствие компонентов гетерохроматина вызывало незначительное усиление экспрессии R2. Эти результаты позволяют постулировать существование особой системы репрессии копий рДНК, прямо не связанной с функционированием коротких РНК и гетерохроматинизацией. Наконец, нам удалось выявить один из компонентов этой системы. Мутации в гене udd, кодирующем белок Underdeveloped (Udd), взаимодействующий с комплексом инициации транскрипции РНК-полимеразы 1, вызывают увеличение на несколько порядков транскрипцию копий рДНК со вставками R2.

Двойная роль РНК-хеликазы Belle (DDX3) в поддержании и дифференцировке мужских герминальных клеток

Drosophila melanogaster

Оленина Л.В.

Лаборатория биохимической генетики животных

Отдела молекулярной генетики клетки (ОМГК)
Наше исследование посвящено изучению функций DEAD-бокс-содержащей РНК-хеликазы Belle (DDX3) в сперматогенезе Drosophila melanogaster. Ранее мы показали, что нарушение экспрессии гомологичного белка человека DBY (DDX3Y) приводит к потере герминальных клеток семенников и бесплодию, при сохранении соматических клеток ниши, что известно как Сертоли-клеточный синдром. Нокдаун Belle в герминальных клетках или мутация ведут к тотальной потере герминальных клеток, в том числе стволовых, в семенниках дрозофилы, при поддержании соматических клеток цисты. В семенниках мутантов belle происходит G2-арест клеточного цикла ранних герминальных клеток, а также снижение экспрессии митотических циклинов А и В. Эктопическая экспрессия дополнительной копии циклина В на фоне РНКi-нокдауна Belle в герминальных клетках обеспечивает частичное спасение герминальных клеток и восстановление фертильности самцов.

Мы обнаружили, что, с другой стороны, RNAi-нокдаун Belle в соматических клетках семенников приводит к формированию больших кластеров ранних герминальных клеток, которые не вступают в дальнейшую дифференцировку. Герминальные клетки в кластерах экспрессируют маркеры стволовых клеток и бесконтрольно и асинхронно пролиферируют. Гиперплазия ранних герминальных клеток сопровождается нарушением адгезионных контактов между герминальными клетками и соматическими клетками цисты. Мы нашли, что нарушение формирования цист приводит к гиперактивации сигнального пути BMP в герминальных клетках кластеров. Эктопическая экспрессия трансгенной копии белка клеточной адгезии бета-интегрина на фоне РНКi-нокдауна Belle в соматических клетках цисты приводит к восстановлению ранних стадий сперматогенеза в 80% случаев и к подавлению туморообразной гиперплазии ранних герминальных клеток. Таким образом, наши данные свидетельствуют о двойственной роли РНК-хеликазы Belle в процессе сперматогенеза и о существенных клеточно-автономных и неавтономных ее функциях в герминальных и соматических клетках семенников.

Для поиска непосредственных мишеней трансляционной регуляции РНК-хеликазы Belle в семенниках мы провели CLIP-seq эксперименты. С помощью глубокого секвенирования двух полученных CLIP-библиотек мы получили наборы данных в 11 и 13 млн. прочтений. Анализ полученных библиотек и картирование их на геномную сборку dm6 геномного браузера UCSC позволил определить 3’ и 5’ нетранслируемые области мРНК, взаимодействующие с Belle в семенниках более чем для 60 белок-кодирующих генов. Последующий GO анализ полученных данных позволил нам построить сети взаимодействий и обнаружить обогащение белок-белковыми комплексами в таких GO категориях, как убиквитинилирование и протеолиз белков, ядерный транспорт белков и РНК в цитоплазму, деаденилирование мРНК, эндоцитоз и др. В ближайших наших планах – подтверждение специфичности ряда найденных взаимодействий независимыми методами.

Публикации Отдела молекулярной генетики клетки (ЛБГЖ):
1.Kotov AA, Olenkina OM, Godneeva BK, Adashev VE, Olenina LV. Progress in understanding the molecular functions of DDX3Y (DBY) in male germ cell development and maintenance. Biosci Trends. 2017 Mar 22;11(1):46-53.

2. Shatskikh AS, Abramov YA, Lavrov SA. Trans-inactivation: Repression in a wrong place. Fly (Austin). 2017 Apr 3;11(2):96-103.

3. Ilyin AA, Ryazansky SS, Doronin SA, Olenkina OM, Mikhaleva EA, Yakushev EY, Abramov YA, Belyakin SN, Ivankin AV, Pindyurin AV, Gvozdev VA, Klenov MS, Shevelyov YY. Piwi interacts with chromatin at nuclear pores and romiscuously binds nuclear transcripts in Drosophila ovarian somatic cells. Nucleic Acids Res.2017. May 2. V. 45. N13.  P. 7666-7680.

4. Ryazansky S, Radion E, Mironova A, Akulenko N, Abramov Y, Morgunova V, Kordyukova MY, Olovnikov I, Kalmykova A. Natural variation of piRNA expression affects immunity to transposable elements. PLoS Genet. 2017 Apr 27;13(4):e1006731.

5. Radion E, Ryazansky S, Akulenko N, Rozovsky Y, Kwon D, Morgunova V, Olovnikov I, Kalmykova A. Telomeric Retrotransposon HeT-A Contains a Bidirectional Promoter that Initiates Divergent Transcription of piRNA Precursors in Drosophila Germline. J Mol Biol. 2017 Oct 27;429(21):3280-3289.

6. Savvateeva-Popova EV, Zhuravlev AV, Brázda V, Zakharov GA, Kaminskaya AN, Medvedeva AV, Nikitina EA, Tokmatcheva EV, Dolgaya JF, Kulikova DA, Zatsepina OG,

Funikov SY, Ryazansky SS, Evgen'ev MB. Drosophila Model for the Analysis of Genesis of LIM-kinase 1-Dependent Williams-Beuren Syndrome Cognitive Phenotypes: INDELs, Transposable Elements of the Tc1/Mariner Superfamily and MicroRNAs. Front Genet. 2017 Sep 20;8:123.

7. Рязанский С., Столяренко А.Д., Кленов М.С., Гвоздев В.А. Индукция системы подавления экспрессии транспозонов в клетках зародышевого пути дрозофилы. Биохимия. 2017. Т. 82. № 5. С. 760-767.

8. Коган Г.Л., Акуленко Н.В., Абрамов Ю.А., Соколова О.А., Фефелова Е.А., Гвоздев В.А. NAC (NASCENT POLYPEPTIDE ASSOCIATED COMPLEX) как тканеспецифичный кофактор при дифференцировке терминальных клеток в семенниках дрозофилы. Молекулярная биология. 2017. Т. 51. № 4. С. 677-682.

9. Фефелова Е.А., Столяренко А.Д., Якушев Е.Ю., Гвоздев В.А., Кленов М.С. система piРНК участвует в привлечении компонента комплекса инициации транскрипции РНК-полимеразы I в ядрышки герминальных клеток. Молекулярная биология. 2017. Т. 51. № 5. С. 824-830.



Трансгены, содержащие фрагменты транспозонов, как модель для изучения piРНК-кластеров в герминальных клетках Drosophila

Акуленко Н. В., Рязанский С.С., Моргунова В.В., Комаров П., Калмыкова А.И.

Лаборатория исследования геномных повторов эукариот (ЛИГПЭ)
Экспрессия мобильных элементов в зародышевой линии контролируется особым классом коротких РНК, Piwi-interacting РНК (piРНК), продуцируемыми геномными локусами, называемыми piРНК-кластерами и связанными с белком Rhino, гомологом Heterochromatin Protein 1 (HP1). Ранее мы показали, что трансгены, содержащие фрагмент ретротранспозона I, образуют de novo piРНК-кластеры в зародышевой линии дрозофилы, что обеспечивает подавление активности I-элемента. Мы заметили, что идентичные трансгены, расположенные в разных геномных сайтах, значительно различаются в производстве piРНК и разделили их на «сильные» и «слабые» piРНК-кластеры. На данном этапе работы мы исследовали, какие изменения хроматина и транскрипции происходят в участках локализации трансгена после их превращения в кластеры piРНК. Мы обнаружили, что образование трансгенного piРНК кластера сопровождается активацией транскрипции обеих геномных цепей, которая, вероятно, инициируется в нескольких случайных сайтах. Хроматин всех трансгенных piРНК-кластеров содержит высокий уровень триметилированного лизина 9 гистона H3 (H3K9me3) и HP1a, тогда как связывание Rhino значительно выше в сильных кластерах. Ни один из этих белков хроматина не был обнаружен в «пустых» сайтах до введения трансгена. Наконец, мы показали, что в ядре полиплоидных питающих клеток образование трансгенного piРНК- кластера на конкретной геномной копии работает по принципу «все или ничего»: либо существует высокое обогащение Rhino и высокая продукция piРНК, либо ассоциация геномной копии с белком Rhino отсутствует. В результате геномные копии слабого трансгенного кластера показывают мозаичную картину колокализации с фокусами Rhino в полиплоидных ядрах, в то время как все копии сильного кластера ассоциируются с Rhino и, следовательно, участвуют в производстве piРНК.

Публикации_Лаборатории_исследования_геномных_повторов_эукариот'>Публикации Лаборатории исследования геномных повторов эукариот:

1. Ryazansky S, Radion E, Mironova A, Akulenko N, Abramov Y, Morgunova V, Kordyukova MY, Olovnikov I, Kalmykova A. Natural variation of piRNA expression affects immunity to transposable elements. PLoS Genet. 2017 Apr 27;13(4):e1006731.

2. Radion E, Ryazansky S, Akulenko N, Rozovsky Y, Kwon D, Morgunova V, Olovnikov I, Kalmykova A. Telomeric Retrotransposon HeT-A Contains a Bidirectional Promoter that Initiates Divergent Transcription of piRNA Precursors in Drosophila Germline. J Mol Biol. 2017 Oct 27;429(21):3280-3289.

Структурно-функциональная изменчивость нейронального гена shuttle craft определяет продолжительность жизни дрозофилы

Симоненко А.В.

Лаборатория геномной изменчивости ОМГК

Ген shuttle craft (stc) кодирует репрессор РНК-полимеразы II, который в эмбрионе дрозофилы экспрессируется в клетках ЦНС и необходим для ее нормального развития. Ранее мы показали, что stc участвует в контроле продолжительности жизни (ПЖ) дрозофилы, причем инсерционная мутация в 5’-нетранслируемой области (НТО) гена приводит к уменьшению экспрессии гена у эмбрионов и увеличению ПЖ.



Природный полиморфизм stc влияет на экспрессию гена и ПЖ.

Для выявления возможной адаптивной изменчивости был проведен анализ полиморфизма 5’ регуляторной области и 5’-НТО гена stc в 200 изогенных линиях, полученных из мух, обитавших в различных климатических и экологических условиях: в Александрове (Россия, 2010-2012 гг.), Умани, Варве и Чернобыле (Украина, 2012). Были также использованы опубликованные последовательности пяти популяций из разных частей мира. Исследуемый район гена продемонстрировал заметную изменчивость, в том числе между близко расположенными популяциями. Среди восьми однонуклеотдных полиморфизмов (ОНП), которые встречались не менее чем в 5% линий из популяции Александров, один был достоверно связан с изменчивостью ПЖ и транскрипции гена stc. При этом, как в случае исследованной нами ранее инсерционной мутации, увеличение ПЖ было связано с уменьшением транскрипции stc. Значимый ОНП входит в возможные мотивы узнавания регуляторных белков. Таким образом, наблюдаемая в природе изменчивость 5’ регуляторной области и 5’-НТО гена stc должен иметь функциональное значение.



Нокдаун stc в нервной системе увеличивает ПЖ и активирует нейрональные гены

РНК-и нокдаун stc во всех клетках нервной системы, а также в ЦНС эмбриона увеличивает ПЖ. В последнем случае изменяется транскрипция нескольких групп генов, участвующих в развитии нервной системы. В частности, активируются гены, определяющие рост аксонов и структуру микротрубочек (Unc115a, Unc115b и др.), структуру базальной мембраны (Vkg), а также гены сериновых протеаз, участвующих в контроле нейрогенеза и скорости развития систем эмбриона (Jon25Bii, Jon99Cii и др.). Этим могут объясняться наблюдаемые нами на более поздних стадиях развития изменения структуры и активности нейромышечных связок.



Заключение

Умеренное (в 1,5-2 раза) снижение транскрипции stc на эмбриональной стадии развития, вызванное структурными изменениями в регуляторной области гена или его нокдауном, связано с увеличением ПЖ дрозофилы. Уменьшение транскрипции stc в ЦНС эмбрионов приводит к активации генов, участвующих в нейрогенезе, что, вероятно, оказывает долговременное влияние на функции организма, в том числе на ПЖ имаго.



Публикации Лаборатории геномной изменчивости ОМГК:

1. Moskalev A, Anisimov V, … Pasyukova E, et al. Aging-US (Albany NY). 2017 Jan 29;9(1):7-25. (Albany, NY, USA).

2. Rybina OY, Sarantseva SV, Veselkina ER, Bolschakova OI, Symonenko AV, Krementsova AV, Ryabova EV, Roshina NV, Pasyukova EG. Tissue-specific transcription of the neuronal gene Lim3 affects Drosophila melanogaster lifespan and locomotion. Biogerontology. 2017 May, V. 18, N 5. P. 739-757.

3. Tsybul'ko E, Krementsova A, Symonenko A, Rybina O, Roshina N, Pasyukova E. The Mitochondria-Targeted Plastoquinone-Derivative SkQ1 Promotes Health and Increases Drosophila melanogaster Longevity in Various Environments. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2017 Apr 1;72(4):499-508.

4. Pasyukova EG, Vaiserman AM. HDAC inhibitors: A new promising drug class in anti-aging research. Mech Ageing Dev. 2017 Sep;166:6-15.

5. Pasyukova E.G., Feniouk B.A., Skulachev V.P. Mitochondria-targeted rechargeable antioxidants as potential anti-aging drugs. RSC Drug Discovery Series. In: Anti-Aging Drugs. From Basic Research to Clinical Practice, Vaiserman A. M. (ed.), The Royal Society of Chemistry, 2017, V. 57, P. 205-227. ISBN: 978-1-78262-435-6. ISSN: 2041-3203.

6. Pasyukova E. G., Vaiserman A. M. HDAC Inhibitors: A New Avenue in Anti-Aging Medicine. In: Anti-Aging Drugs. From Basic Research to Clinical Practice, Vaiserman A. M. (ed.), The Royal Society of Chemistry, 2017, V. 57, P. 514-534. ISBN: 978-1-78262-435-6. ISSN: 2041-3203. 
Неканонические функции сигма-факторов бактериальной РНК-полимеразы в регуляции транскрипции

Пупов Д.В.

Лаборатория молекулярной генетики микроорганизмов ОМГК

Сигма-субъединица бактериальной РНК-полимеразы (РНКП) играет главную роль в процессе узнавания промоторов, а также на более поздних стадиях инициации транскрипции, включая инициацию синтеза РНК, уход РНКП с промотора и образование пауз транскрипции. Ранее в нашей лаборатории на примере сигма70-субъединицы Escherichia coli было показано, что в данных процессах участвует консервативный район 3.2 сигма-субъединицы, который позиционирует матричную цепь ДНК в активном центре РНКП, стимулирует связывание инициаторных NTP (iNTP), а затем облегчает диссоциацию сигма-субъединицы за счет взаимодействий с синтезируемой РНК.

Мы исследовали роль района 3.2 сигма70-субъединицы E. coli во взаимодействиях РНКП с промотором rrnBP1 генов рРНК. Данный промотор формирует с РНКП крайне нестабильные комплексы, инициация транскрипции на нем зависит от концентрации инициаторных нуклеотидов и регулируется по механизму строгого контроля с участием белка DksA и алармона ppGpp. Нами показано, что мутации в районе 3.2 сигма-субъединицы РНКП сильно увеличивают стабильность комплексов РНКП с rrnBP1-промотором, но незначительно влияют на связывание iNTP, в отличие от изученных ранее сильных промоторов. С другой стороны, мутации в районе 3.2 влияют на эффективность подавления транскрипции фактором DksA и ppGpp как in vitro, так и in vivo. Можно заключить, что район 3.2 играет ключевую роль в образовании нестабильных комплексов РНКП с промотором rrnBP1 и в регуляции синтеза рРНК на различных стадиях роста клеток.

С использованием флуоресцентно-меченых вариантов сигма70-субъединицы мы измерили кинетику перехода от инициации к элонгации транскрипции на разных промоторах (что сопровождается разрывом контактов сигма70 с -10 элементом промотора и изменением флуоресценции). Было показано, что мутации в районе 3.2 значительно снижают скорость ухода РНКП с промотора, а факторы DksA и GreA, связывающиеся во вторичном канале РНКП, способны увеличивать эффективность этого процесса.

Следующей задачей наших исследований было понять, какие функции выполняет район 3.2 в случае альтернативных сигма-субъединиц (сигма38, 32 и 28). Оказалось, что в случае всех перечисленных сигма-факторов делеция района 3.2 приводит в увеличению стабильности комплексов РНКП с соответствующими промоторами (в отличие от большинства промоторов сигма70). Также было показано, что фактор DksA способен увеличивать стабильность промоторных комплексов, формируемых РНКП с сигма32- и 28-субъединицы, в отличие от комплексов, содержащих сигма70- и сигма38-субъединицы. Таким образом, роль района 3.2 сигма-субъединицы и механизмы регуляции транскрипции фактором DksA различны для главной и альтернативных сигма-субъединиц.

Публикации Лаборатории молекулярной генетики микроорганизмов ОМГК:

1. Miropolskaya N, Esyunina D, Kulbachinskiy A. Conserved functions of the trigger loop and Gre factors in RNA cleavage by bacterial RNA polymerases. Journal of Biological Chemistry. 2017 Apr 21;292(16):6744-6752.

2.Agapov A, Olina A, Esyunina D, Kulbachinskiy A. Gfh factors and NusA cooperate to stimulate transcriptional pausing and termination. FEBS Lett. 2017 Mar;591(6):946-953.

3.Petushkov I, Esyunina D, Kulbachinskiy A. σ38-dependent promoter-proximal pausing by bacterial RNA polymerase. Nucleic Acids Res. 2017 Dec 7. 45(6):3006-3016.

4. Petushkov I, Esyunina D, Kulbachinskiy A. Possible roles of σ-dependent RNA polymerase pausing in transcription regulation. RNA Biol. 2017 Aug 17:1-5.

5. Miropolskaya N, Petushkov I, Kulbachinskiy A, Makarova AV. Identification of amino acid residues involved in the dRP-lyase activity of human Pol ι. Sci Rep. 2017 Aug 31;7(1):10194.

6. Petushkov I, Esyunina D, Mekler V, Severinov K, Pupov D, Kulbachinsky A. Interplay between σ region 3.2 and secondary channel factors during promoter escape by bacterial RNA polymerase. Biochem J. 2017 Dec 1;474(24):4053-4064.

7. Yurieva O, Nikiforov V Jr, Nikiforov V, O'Donnell M, Mustaev A. Insights into RNA polymerase catalysis and adaptive evolution gained from mutational analysis of a locus conferring rifampicin resistance. Nucleic Acids Res. 2017 Nov 2;45(19):11327-11340.

8. Kazachenko KY, Miropolskaya NA, Gening LV, Tarantul VZ, Makarova AV. Alternative splicing at exon 2 results in the loss of the catalytic activity of mouse DNA polymerase iota in vitro. DNA Repair (Amst). 2017 Feb;50:77-82.

9. Kazachenko K.Y., Miropolskaya N.A. ,Gening L.V.,Tarantul V.Z., Makarova A.V. 2017. Alternative splicing at exon 2 results in the loss of the catalytic activity of mouse DNA polymerase iota in vitro. DNA Repair. 50:77-82.

10. Миндлин С.З., Петрова М.А. 2017. О происхождении и распространении устойчивости к антибиотикам: результаты изучения древних бактерий из многолетнемерзлых отложений. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология 35 (4): 3-11.

Структура и функции бактериальных белков-аргонавтов
Кузьменко А.В.

Лаборатория биологии РНК и эпигенетики (ЛБРиЭ)


Открытие РНК-интерференции произвело настоящую революцию в нашем понимании механизмов регуляции экспрессии генов. В основе данного процесса лежит взаимодействие коротких некодирующих РНК длиной 20-30 нт с комплементарными им РНК-мишенями, что может приводить к деградации мРНК или подавлению ее трансляции. Ключевую роль в процессах РНК-интерференции у эукариот играют белки-Аргонавты, которые образуют рибонуклепротеиновый комплекс с короткими гидовыми РНК и осуществляют дальнейшее узнавание и разрезание молекулы-мишени. До недавнего времени подобные системы не были известны для прокариотических организмов. Однако несколько лет назад белки-Аргонавты были открыты и у бактерий. Несмотря на определенное сходство в работе бактериальных белков с системой РНК-интерференции эукариот, белки-Аргонавты бактерий могут функционировать в отсутствие дополнительных специализированных факторов, и при этом узнают не РНК, а ДНК-мишени. На сегодняшний день многие аспекты биогенеза гидовых РНК и ДНК, а также функционирования белков-Аргонавтов в клетках бактерий остаются неизвестными.

Биоинформатический анализ геномных баз данных с целью поиска новых генов бактериальных Аргонавтов и ассоциированных с ними белков позволил нам идентифицировать более 800 представителей этого семейства, включая «длинные» и «короткие» Аргонавты, содержащие полный или усеченный набор характерных для этого семейства доменов. Около 10 перспективных белков-Аргонавтов, относящихся к разным классам и различающихся по своим свойствам, были экспрессированы в гетерологической системе E. coli, выделены и очищены до гомогенности. Анализ ассоциированных с ними коротких нуклеиновых кислот показал, что различные белки способны связывать как короткие ДНК, так и РНК, при этом паттерн длин этих молекул индивидуален для каждого из белков. Полученные экспериментальные данные также свидетельствуют о наличии остатка фосфорной кислоты на 5’-конце коротких ДНК/РНК.

Все исследованные нами представители длинных, каталитически активных белков-Аргонавтов связываются только с молекулами коротких ДНК. Это означает, что данные белки-Аргонавты, скорее всего, используют ДНК-гиды для узнавания ДНК-мишеней. Действительно, анализ их активности в системе in vitro показал, что все они являются ДНК-зависимыми ДНК-нуклеазами и способны с высокой эффективностью осуществлять разрезание однонитевой ДНК. При этом уровень активности различных белков зависит от структуры гидовой ДНК, присутствия в реакции ионов двухвалентных металлов, ионной силы и температуры реакции. Стоит отметить, что способность описанных нами белков-Аргонавтов эффективно осуществлять программируемое разрезание ДНК-мишеней в диапазоне физиологических температур открывает перспективу для их дальнейшего использования в качестве инструмента для направленного редактирования генома клеток млекопитающих.



Поделитесь с Вашими друзьями:
  1   2   3   4


База данных защищена авторским правом ©grazit.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница