Занятие 2 Физико-химические свойства белков и методы их выделения



Дата13.06.2018
Размер42.8 Kb.
ТипЗанятие
Занятие 1.2

Физико-химические свойства белков и методы их выделения

Цель занятия

-изучить основные свойства белка: растворимость, гидратация, ионизация белков в растворе, осаждение белков из растворов (обратимое и необратимое).



Студент должен уметь:

- открывать качественно белок в моче (пробой Геллера и с сульфосалициловой кислотой);

- количественно определять белок в моче с помощью тест - полоски «Альбуфан».

- осаждать белки с помощью солей тяжелых металлов.



Необходимый исходный уровень

Из курса биоорганической химии студент должен знать:

- физико-химические свойства белков;

- уровни организации белковой молекулы



Вопросы для самоподготовки

  1. Строение белков: первичная, вторичная, третичная и четвертичная структуры.

  2. Физико-химические свойства белков: ионизация в растворе, гидратация и растворимость.

  3. Осаждение белков из растворов. Механизм обратимого осаждения белка, факторы, вызывающие обратимое осаждение белков.

  4. Денатурация белков: факторы, вызывающие денатурацию, механизм тепловой денатурации белков. Свойства денатурированного белка

  5. Практическое использование обратимого и необратимого осаждения белков в медицине.

  6. Ренатурация (ренативация).

  7. Выделение и очистка белков.

Практическая часть занятия

Лабораторная работа 1

Качественная реакция на обнаружение белка в моче - проба Геллера

Принцип метода: концентрированная минеральная кислота НNO3 вызывает денатурацию белка и образует комплексные соли белка с кислотой. На границе двух слоев жидкостей образуется осадок в виде небольшого белого кольца.

Ход работы:в пробирку наливают 1 мл концентрированной НNO3, наклоняют пробирку под углом 450 и осторожно по стенке пипеткой наслаивают 1мл мочи.

Результат:
Вывод:

Лабораторная работа 2

Качественная реакция на обнаружение белка в моче

с концентрированной сульфосалициловой кислотой

Принцип метода: концентрированная органическая сульфосалициловая кислота вызывает денатурацию белка. Выпадение белка в виде осадка или мути связано с дегидратацией белковых частиц и образованием комплексных солей белка с кислотами.

Ход работы: к 1 мл мочи приливают 3 капли 20% сульфосалициловой кислоты. При наличии белка в моче образуется белый осадок.

Результат:
Вывод:

Лабораторная работа 3

Количественное определение белка в моче с помощью тест – полоски «Альбуфан»

Принцип метода: тест основан на изменении цвета кислотно-основного индикатора под влиянием белков. Проба наиболее чувствительна к альбумину и реагирует на его присутствие в моче при концентрации 0,1-0,15 г/л.

Ход работы: не касаясь реактивной зоны руками, тест-полоску опускают на 1-2 секунды в исследуемую мочу так, чтобы зона была смочена. Затем удаляют излишки мочи с полоски и приблизительно через 1 минуту сравнивают окраску зоны индикации с цветной шкалой.

Результат:
Вывод:

Лабораторная работа 4

Осаждение белков солями тяжелых металлов

Принцип метода: при взаимодействии функциональных групп боковых радикалов аминокислот в молекуле белка с ионами тяжелых металлов, которые адсорбируются на поверхности белковой молекулы, разрушается пространственная структура белка и происходит его денатурация с последующим образованием осадка.

Ход работы: в две пробирки наливают по 10 капель раствора белка. Затем в первую пробирку прибавляют по каплям 5% раствор ацетата свинца, во вторую - 5% раствор сульфата меди.

Результат:
Вывод:
Практическая значимость работы

На явлениях денатурации белков основаны приемы и методы асептики, антисептики, дезинфекции и дезинсекции в медицине, пастеризация и консервирование в пищевой промышленности. Свойство белков связывать тяжелые металлы используется в медицинской практике: белки применяют при отравлении солями ртути, свинца, меди как противоядие



Вопросы для самоконтроля

  1. Заполнить таблицу

Уровень структурной

организации белка



Типы связей, стабилизирующих

данную структуру



1 – ая структура

2 – ая структура

3 – ая структура

4 – ая структура






2. Ответить на вопросы и решить задачу:

а) Какие связи могут образовываться между следующими парами аминокислот, входящих в состав белка:

аспарагиновая кислота - лизин

цистеин - цистеин

аланин - лейцин

серин - глутаминовая кислота

б) Изоэлектрическая точка белка 5,5. Какой заряд приобретает данный белок при рН 3 и при рН 6,5?

3. Какой заряд несут белки сыворотки крови, если ИЭТ альбуминов равна 4,7, глобулинов - 6,7, а рН крови – 7,4?



4. В какой области находится ИЭТ трипептида вал-асп-ала? Написать ионное состояние трипептида при рн=7,0

Литература

а) основная учебная литература

  1. Чиркин, А.А. Биохимия: Учебное руководство/ А.А. Чиркин, Е.О. Данченко. - М.: Мед. лит., 2010.-624 с.


б) дополнительная литература

  1. Биологическая химия с упражнениями и задачами : учебник / под

ред. С. Е. Северина. — 2-е изд., испр. и доп. — М. : ГЭОТАР-Медиа, 2013. — 624 с.

  1. Комов, В.П. Биохимия: учебник / В.П. Комов, В.Н. Шведова. – М.: Дрофа, 2006. – 638 с.

  2. Нельсон, Д. Основы биохимии Ленинджера. В трех томах. / Д.Нельсон, М Кокс. -М.: Бином. Лабораторные знания, 2011.- т.1 -682 с.

Каталог: sveden -> education
education -> Аннотации рабочих программ дисциплин (модулей)
education -> История (наименование дисциплины ) Цель освоения дисциплины : Место дисциплины в структуре опоп. Дисциплина «Физические основы прочности и пластичности»
education -> Цель освоения дисциплины (модуля). Основной целью освоения дисциплины «Английский язык»
education -> Тема: Возникновение социологии как самостоятельной науки и её развитие в XIX – ХХ вв. Развитие социологии в России
education -> Занятие №14 " Растворы вмс. Свойства биополимеров"
education -> Сестринский уход в XIX-ХХ веках
education -> Методы клинической лабораторной диагностики
education -> М. 1 Общенаучный цикл. Базовая часть. М 1 Современные теории массовой коммуникации Цели освоения дисциплины


Поделитесь с Вашими друзьями:


База данных защищена авторским правом ©grazit.ru 2019
обратиться к администрации

войти | регистрация
    Главная страница


загрузить материал